中草药对弧菌的抑制作用研究论文
摘 要：目的 阐明现常用抑菌中草药在水产养殖业的用药疗效，为水产养殖细菌性疾病的防治提供用药参考。方法 采用微量肉汤稀释法测定了12种水产养殖常用的抗菌中药产品对5株常见海洋致病菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果 NZ方与市售“虾倍健”抑菌效果最佳，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、创伤弧菌、哈维弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌浓度在0.313～1.250 g/L，而其他市售抗菌中草药大黄末、六味黄龙散、三黄散、根莲解毒散、七味板蓝根散、大蒜素、病毒速灭亡、穿梅三黄散、白头翁口服液、健肝宝和地锦草末对5种海洋致病菌抑制浓度均大于40.000 g/L。 结论 给水产养殖细菌性疾病的防治提供了用药建议及使用参考。
关键词：NZ方; 弧菌; 中草药
近年来，随着对虾疾病的爆发越来越频繁，我国对虾养殖业特别是华南地区的对虾养殖受病害肆虐情况严重，部分地区对虾幼体患病死亡率达100%，给殖业造成了严重的经济损失，如何有效防治对虾病害侵袭也倍受水产业界人士关注和重视[1-2]。虾的红体、偷死、肌肉白浊、烂眼烂鳃、荧光、黑斑等症状多由弧菌及嗜水气单胞菌引起，而根据上述病症，农业部“用药指导”也给出相关的用药建议。其中，大黄末、地锦草等被广泛推荐应用。根据现行国家标准，抗菌类中药制剂有38种，笔者选取其中最为常用的12种中药制剂与NZ方对5株常见的海洋致病菌进行体外抑菌作用的比较，为水产养殖细菌性疾病的防治提供用药参考。
1 材料与方法
1.1 菌株
标准菌株：副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticuss，V.p);溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus，V.a);哈维氏弧菌(Vibro harveyi，V.h);创伤弧菌(Vibrio vulnificus，V.v);嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，A.h)由中国南海研究所提供。
1.2 培养基
2216E 液体培养基(青岛高科园海博生物技术有限公司)。2216E琼脂培养基(青岛高科园海博生物技术有限公司)。
1.3 药物及其制备
NZ方(檵木叶、半边莲花、地胆草等8味)：由中药开发研究所研制。大黄末：每1 kg饲料用本品5.0 g;六味黄龙散：每1 kg饲料用本品4.0 g。三黄散：每1 kg饲料用本品5.0 g;根莲解毒散：每1 kg饲料加本品10.0 g。七味板蓝根散;每1 kg饲料用本品2.5 g;大蒜素：每1 kg饲料用本品0.6 g。虾倍健：每1 kg饲料用本品4.0 g;病毒速灭亡：每1 kg饲料，用本品20 mL。穿梅三黄散：每1 kg饲料用本品4.0 g;白头翁口服液：每1 kg饲料用本品3 mL。健肝宝：每1 kg饲料用本品2.0 g;地锦草末：每1 kg饲料用本品10.0 g。分别取上述药物16.0 g制备成100 mL药液。
1.4 仪器
仪器：分析天平(BT211B，德国Sartorius公司);手提式压力蒸汽灭菌锅(OIJ2006-04，上海东亚压力容器制造有限公司);双人单面净化工作台(SW-CJ-2FD，苏州净化设备有限公司);恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)。
1.5 药物配制
将受试药物用适宜溶剂配制成0.8 g/ mL的药液，高压灭菌后，按二倍递减浓度稀释，共配制成11个梯度浓度的药物稀释液。
1.6 菌种复苏与培养
将冷藏保存的菌种在琼脂板上划线培养复苏24 h，再挑取生长良好的单菌落接种到装有2216E肉汤培养基的摇菌管中，置恒温培养箱中37 ℃培养至对数期。
1.7 测量
以2216E肉汤作为空白对照液调零，在波长600 nm处测定菌悬液OD值，计算含菌数，并稀释成1×106 CFU/ mL的菌悬液。
1.8 加样孵育
按无菌操作吸取药液和菌悬液各100 μl于96孔板第1-11孔中，第12孔加入配制溶剂和菌悬液各100 μl作阴性对照，置恒温培养箱中37 ℃培养20 h。
1.9 结果判读
肉眼观察，药物最低浓度孔无细菌生长者，即为该试菌MIC值。难判断者，可将该孔中培养液于无菌琼脂板上划线，37 ℃培养20 h后读取结果。
2 结果与分析
NZ方与12种市售抑菌中药品对5种危害较大的海洋致病菌的最低抑菌浓度的测定结果可知，虾倍健抑菌浓度最低，抑菌效果最佳，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、创伤弧菌的最低抑菌浓度为0.313 g/L;对哈维弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌浓度为1.250 g/L;穿梅三黄散次之，在5.000～40.000 g/L;而大蒜素、病毒速灭亡、根莲解毒散的抑菌效果最差，均在40.000 g/L以上，见表1。
对12种药品与NZ方的最低抑菌浓度及其标示用量进行比较，其中仅有虾倍健标示用量大于最低抑菌浓度，也就是说，按产品标示用法用量，仅有虾倍健能达到预期抑菌效果，见表2。
3 讨论
根据上述研究结果显示，市面上抗菌药物种类繁杂，而养殖户面对细菌感染疾病的爆发却无可奈何，盲目用药，直接损害了养殖户的利益[6-7]。在笔者随机选取的10余种常用抗菌中药的实验结果看来，情况令人堪忧，这些在养殖过程中的应用十分广泛的药品，在对其进行的最低抑菌浓度试验中其最低抑菌浓度根本无法达到抑菌防治效果[8]。
随着抗生素在水产养殖的广泛使用。近年来，耐药菌的不断产生，养殖户对细菌性疾病的爆发束手无策，给养殖业带来重大的损失，中草药以其安全、副作用小、无耐药性等独特的优势，逐渐成为研究和开发的热点，市面上标榜抗菌的中草药五花八门，但加工粗糙，质量良莠不齐，夸大药效，导致养殖户用药无效，对中草药产品失去信心[9-11]。
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